دراسة بعض الصفات الحركية لإنزيم بايروفيت كاينيز M2 PKM2 المنقى من امصال مرضى سرطان الثدي

الملخص

تمت تنقية إنزيم بايروفيت كاينيز M2 عن طريق ترسيب بروتين المصل لمرضى سرطان الثدي باستخدام 65% (NH₄)₂SO₄, وتم استخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني CM-Cellulose لتنقية إنزيم البايروفيت كاينيزM2، إذ تم الحصول على قمة بروتين واحدة من خطوة الغسل وقمة أخرى بعد الاسترداد ، وقد أشارت النتائج أن الفعالية لإنزيم PKM2 17.5U/mL والفعالية النوعية كانت 145.8U/mg وكان تركيز البروتين 0.12mg/mL، اما مقدار الاسترجاع فبلغ 42% وعدد مرات التنقية كانت 3 مرة، كما واشارت نتائج تنقية إنزيم البايروفيت كاينيزM2 لعمود الترشيح الهلامي  Sephadex G-200 إلى ظهور حزمة بروتينية واحدة فقط ذات فعالية عالية لإنزيم الباريوفيت كاينيز M2 المنقى وصلت إلى 20U/mL وكانت الفعالية النوعية  400U/mg وتركيز البروتين 0.05 mg/L، اما مقدار الاسترجاع فبلغ 40% وعدد مرات التنقية كانت 8 مرة، كما تم دراسة الظروف المثلى لإنزيم البايروفيت كاينيز M2 المنقى من امصال مرضى سرطان الثدي من خلال استخدام عدة تراكيز للمادة الاساس الفوسفواينول بايروفيتEPE ، وعدة قيم مختلفة من pH ودرجات حرارية مختلفة متدرجة إذ سجلت النتائج قيم كانت للتركيز الامثل للمادة الاساس 3mM، ورقم هيدروجيني pH 7 ودرجة حرارة مثلى  37^oC ، ووقت تفاعل30min  وكذلك استخرجت قيم ثبات او استقرار الإنزيم بحامضية ودرجات حرارية مختلفة، إذ كان إنزيم PKM2 أكثر استقرارًا عند الرقم الهيدروجيني 9-7 وسجل الإنزيم فعالية متبقية بنسبة ثبات 100-80%، وكان إنزيم PKM2 مستقرا ويحافظ على فعاليته بنسبة  %100عند درجة الحرارة من37-30^oC، وسجل الإنزيم فعالية متبقية بنسبة ثبات %100-82 لدرجة حراة تصل 52^oC ، كما تم دراسة الخواص الحركية من خلال حساب قيمة السرعة القصوى Vmax وثابت ميكيلس Km  لإنزيم PKM2  المنقى من امصال مرضى سرطان الثدي من تطبيق العلاقة  الخطية للينوفر – بيرك Line Weaver-Burk plot ، إذ وجد أن Vmax 20.5 وKm 0.66.